多聚磷酸对GFP相态转变的影响

来源：襄阳高隆磷化工有限公司 | 发布时间：2020/11/4 10:06:25

多聚磷酸对GFP相态转变的影响,首 先，分别观测了LB培养基中表达了GFP的细菌与SMW培养基（低养分培养基）中细菌表达的GFP的状态。多聚磷酸厂家,多聚磷酸价格。实验结果显示，LB培养基中的细菌GFP均匀分散在菌体中，而SMW培养基中的细菌蛋白发生了明显的相分离，蛋白分别聚集于菌体的两端。由于两种培养基中细菌内多聚磷酸含量具有差异，因此设想这种相分离的发生与细菌内部的多聚磷酸有关。

接下来，利用阳离子染料DAPI对细菌内部的多聚磷酸进行染色，发现在发生相分离的细菌体中，GFP的绿色荧光点与多聚磷酸包裹的DAPI形成的黄色点发生重合，这则初步证实了多聚磷酸与蛋白的相互作用诱发了这种相分离行为。
动态过程显示，绿色荧光蛋白在浓度逐渐增高的多聚磷酸的作用下逐渐发生聚集，最后在30分钟时在细菌的两端形成蛋白微液滴结构。进一步的实验中，通过逐渐调节培养基中的养分浓度来控制细菌内的多聚磷酸含量，结果在60分钟时，GFP依旧发生了聚集。而反过来，逐渐提高培养基中的养分，原本聚集的GFP又分散开来。以上现象充分证明了多聚磷酸对GFP的相分离起到了重要作用。

多聚磷酸含量对蛋白聚集的影响
随后，在菌体外进行了液-液相分离机理的研究。首 先，发现未加入多聚磷酸的GFP溶液始终是澄清的，而加入了多聚磷酸的GFP溶液随时间推移发生浑浊，显微镜下可以明显观测到在该溶液中存在蛋白小液滴。以此现象为基础，通过调节多聚磷酸的链长以及阴阳离子的比例(R-/+)来对多聚磷酸与蛋白的相互作用机理进行评估。实验结果显示，多聚磷酸的存在对蛋白的相分离有明显的促进作用；并且随着多聚磷酸链长的增加，蛋白相分离的驱动力变大，越容易发生蛋白的液-液相分离；与此同时，电荷比对相分离现象也有明显的影响，R-/+越大，形成的液滴越大，即越容易发生相分离。